31- TERAPIA GÉNICA: DESARROLLO DE UN SISTEMA DE TRANSFERENCIA GENÉTICA ORAL, NO VIRAL NO INVASIVO. Por Kurt Wunsch y Charlotte Hauser. Traducción de Jaime Ramírez.
Actualmente, los sistemas de liberación de genes basados en virus, se han venido estudiando y aplicando en terapia génica. Sin embargo, estos sistemas virales han mostrado muchos inconvenientes. El mayor desafío de los sistemas virales pasa por la respuesta inmunológica del huésped hacia las proteínas virales y la vía de administración generalmente invasiva.
Una alternativa a la liberación mediada por virus son las terapias de liberación génica no viral, que aunque se consideran más seguras, han resultado hasta la fecha, como poco, insatisfactorias. La ineficiente liberación del gen y la expresión genética poco mantenida constituyen los principales problemas.
El sistema de transferencia genética no viral descrito aquí, sin embargo, reúne muchas propiedades prometedoras, y creemos que logrará vencer los obstáculos mencionados. La mayor ventaja que ofrece es que se diseña como tratamiento oral, haciéndolo más conveniente y fácil en una administración continuada. En esencia, el sistema de liberación genética descrito se administra como cocktail premezclado de tres componentes:
1- Vector de DNA conteniendo un segmento de expresión que codifica un gen terapeutico de interés, y varios elementos de respuesta a progesterona (PRE), introducidos en su esqueleto.
2- Receptor de progesterona humana recombinante (rhPRp).
3- Progesterona como compuesto esteroide, en emulsión aceitosa.
El actual conocimiento permite suponer que la presencia del compuesto esteroide facilita la transferencia del componente ternario a la célula diana aumentando así la liberación del gen.
Una vez dentro de la célula el receptor de progesterona va a seguir la ruta fisiológica de transducción de esteroides . El receptor de esteroide se dirige al núcleo debido a su secuencia de localización nuclear, translocándose el vector de DNA unido a él. Este direccionamiento al núcleo lleva a un aumento de la expresión del gen terapeutico.
En estudios pilotos llevados a cabo, el cocktail de transferencia genética se administra a ratones de cepa natural vía digestiva por intubación. El análisis posterior de los animales tratados reveló la presencia y expresión del vector de DNA transferido en varios órganos distintos indicando una captura sistémica del vector de DNA después de la administración oral.
Entre los trastornos genéticos que pensamos que pueda aplicarse esta forma de terapia génica se encuentra los relacionados con la coagulación sanguínea.
Nuestro principal interés se centra ahora en el ajuste de nuestro sistema de transferencia genética oral para un tratamiento de la Hemofilia B que es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma X, causada por deficiencia en el factor de coagulación IX. La incidencia de esta enfermedad es de 1/5000 en niños nacidos. Los hemofílicos sufren abundantes hemorragias por esta deficiencia de la cadena del sistema de coagulación, que provoca daños graves en articulaciones y en tejidos internos.
El tratamiento de la hemofilia B es posible con la adición de factor IX que hasta hace poco se preparaba a partir de concentrados de donantes, con el evidente riesgo de contaminación con agentes infecciosos como HIV o hepatitis.
Aunque los métodos de obtención de proteínas recombinantes proporcionan factor IX de gran pureza, el aporte exógeno requiere de repetidas administraciones intravenosas a lo largo de la vida del paciente. Hemos iniciado estudios animales, tratando ratones macho, knock-out, sin factor IX, hemofílicos con nuestro sistema de transferencia génica. De este modo tratamos de revertir la deficiencia del factor IX en los ratones proporcionando el gen afectado. Los análisis de los animales tratados con el sistema oral de transferencia genética muestran una disminución de los tiempos de coagulación medidos como tiempo de protrombina parcial, al igual que la presencia del vector de DNA en varios órganos.